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穩定細胞系建立

高質量的穩定細胞系在生物學研究中扮演著非常重要的角色，包括基因功能研究、重組抗體、藥物開發等。穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。維真生物可為科研工作者提供OE質粒構建、OE慢病毒包裝、過表達效果驗證以及OE細胞系建立等服務。*OE=overexpression

 維真生物具有多年穩轉株篩選經驗，可為客戶篩選高質量的穩定細胞株，客戶可從維真生物細胞庫中選擇相應的細胞株，也可提供自有細胞株。具體服務內容見下面：

*客戶提供自有細胞，需要額外支付細胞測試費用！

*如您對上述服務感興趣，請您點擊“歡迎垂詢”留下您的信息，我們將盡快聯系您。

相關服務： 分子克隆 基因過表達效果的檢測 慢病毒包裝

 將外源DNA/shRNA克隆到帶有某種抗性基因的載體上，重組載體被轉染至宿主細胞并整合到其染色體中，并能隨細胞分裂穩定傳遞下去，用載體中所含抗性基因進行篩選。常用的真核表達載體抗性篩選標志物有新霉素(neomycin)、殺稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。

 1. 種子細胞優良：維真生物所有的細胞均從ATCC 細胞庫購買，代數低且無污染；

2. 生產工藝穩定：嚴格的篩選及靶基因表達驗證體系；

3. 細胞活力無損：嚴格的建系后連續 5 代細胞增殖活力評價；

4. 產品質量保證：采用 RT-qPCR 驗證，保證表達水平。

慢病毒技術手冊

1. 在什么情況下，我需要建立穩轉細胞系？

 穩轉細胞系是相對瞬時轉染而言的。瞬時轉染的表達時間短暫，外源基因導入整合基因組的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，不能隨細胞分裂而一同復制，導致最后拷貝數被稀釋，無法達到持續表達外源基因的目的。通常，在下面幾種情況下需要建立穩轉細胞系：

 ①長期在目的細胞中研究基因功能，通過建立穩轉細胞系，可以降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，方便實驗研究；

 ②部分蛋白半衰期極長，瞬時RNA只能干擾表達，無法去除已經表達的目的蛋白，通過構建穩轉細胞系可以實現更好的基因干擾效果；

 ③瞬轉會引入極高拷貝數的表達，導致因為人為因素造成實驗結果的不精確，建立穩轉細胞系可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究；

④需要用誘導表達系統的，主要是一些致死基因或者是需要時空表達的；

⑤需要用細胞做動物實驗的，比如裸鼠成瘤等，往往需要建立穩轉細胞系。

2. 建立穩轉細胞系時用質粒好還是慢病毒好？

 理論上用質粒可以建立穩定細胞株的，但是質粒整合入基因組的效率極低，很難成功。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組，效率很高，是建立穩定細胞株的理想方式。通過慢病毒篩選穩定細胞株是目前主流的方法。

3. 影響穩定細胞株建立的因素有哪些？

①外源基因整合的幾率：決定了穩轉株篩選的難易程度；

②插入外源基因片段的拷貝數：通常，低拷貝或者單拷貝可以降低人為因素的干擾；

③整合位點轉錄活躍度：決定了穩轉株篩選細胞后穩轉株中外源基因片段的表達質量；

 ④外源基因片段整合到細胞后的穩定性：不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩定性，有些區域易發生重組或者丟失，從而使穩轉株篩選后出現丟失的現象。