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猴痘假病毒

 自2022年5月以來，多國陸續發現猴痘病例，并迅速向全球蔓延。7月23日，世界衛生組織（WHO）宣布，猴痘疫情已構成“國際關注的突發公共衛生事件”，這是世衛組織針對全球突發公共衛生事件發出的最高級別警報。雖然，針對天花病毒的疫苗和藥物為應對猴痘提供了選擇，但目前尚沒有針對MPV的特異性疫苗和特效藥物。維真生物積極響應，開發出可用于MPV核酸檢測試劑盒性能測試的假病毒系列產品，助力猴痘致病機理及防治等相關研究。

1. 產品簡介

維真生物基于全面的病毒包裝平臺和穩定的生產工藝，將Monkeypox Virus （MPV）特異性靶標序列F3L和包膜蛋白B6R的基因序列，分別克隆構建至慢病毒，腺病毒和腺相關病毒（AAV）載體上，成功開發出高質量的猴痘假病毒系列產品，并且具有良好的生物安全性和穩定性。

*除上述F3L和B6R的載體和病毒產品外，我們還可以提供其他猴痘相關基因的載體構建與病毒包裝定制服務，助力猴痘病毒的研究，歡迎各位老師垂詢！

2. 產品用途

用于猴痘病毒核酸檢測試劑盒的開發和性能評價，效果驗證，作為qPCR實驗的陽性標準品使用。

3. 研究背景

1.猴痘病毒簡介

 猴痘病毒(monkeypox virus，MPV) 屬于痘病毒科正痘病毒屬，同屬的還有天花病毒、牛痘病毒和痘苗病毒。MPV是一種有包膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組大小約197kb，被包裹在直徑為140-260nm多晶的啞鈴形核內，病毒顆粒呈磚形或橢圓形。MPV基因組有一個高度保守的中央編碼區，約56-120 kb，兩側是可變區域和末端重復序列。根據遺傳、地理和表型變異，該病毒有兩個不同的分支，即西非和剛果盆地，后者也被稱為中非分支，毒性最強。通過全基因組測序已獲知本次疫情傳播的病毒屬于較溫和的西非分支。

彩色透射電子顯微鏡捕獲的猴痘病毒顆粒 （來源英國《新科學家》雜志網站）

2.MPV感染癥狀

 MPV引起的人類疾病癥狀與天花相似，但其致命性和傳染性不如天花病毒。猴痘潛伏期為5-21天，最先是發熱階段，通常持續1至3天，癥狀包括發熱、寒戰、劇烈頭痛、淋巴結腫大、背部疼痛、肌肉疼痛和疲勞至極。發熱期過后是皮疹期，通常持續2-4周，患者先是面部出現皮疹，隨后擴散到身體其他部位，皮疹病變由斑疹(基底扁平)演變為丘疹(隆起、堅硬、疼痛)、小泡(充滿透明液體)、膿皰(充滿膿液)，最后是結痂。根據感染MPV的分支和醫療情況，MPV致死率為0~11%，幼兒死亡率更高。

MPV感染癥狀 （Narendra Kumar, Journal of Autoimmunity. 2022）

3.MPV入侵細胞機制

 與多數DNA病毒不同，MPV在受感染細胞的細胞質內復制，而非細胞核內。MPV復制過程中產生兩種感染性病毒顆粒：細胞內成熟病毒(MV)和細胞外包膜病毒(EV)，其中，MV通過微胞飲或膜融合進入細胞，而EV通過膜融合進入。MV外有一層脂蛋白包膜，包裹病毒核心和包含蛋白質的側體，在外界環境中相對穩定，主要參與介導宿主之間的傳播；EV由脂質膜包裹MV外周形成，它來源于高爾基體或核內體。在胞質內完成病毒DNA的復制和病毒蛋白的組裝后，MV經細胞裂解被釋放，而EV則通過胞吐作用離開細胞。

值得注意的是，MPV的復制，轉錄，組裝和釋放過程由多個不同的蛋白質參與。

MPV的生命周期 （Narendra Kumar, Journal of Autoimmunity. 2022）

4.MPV傳播途徑

 猴痘是一種人畜共患病，即一種由動物傳播給人類的疾病。目前，MPV的宿主仍不清楚，非洲的嚙齒動物可能參與了MPV感染傳播。MPV可通過接觸受感染動物的體液、病變皮膚或內部粘膜、呼吸道飛沫或受感染物品進行傳播。

5.MPV檢測方法

 由于MPV感染的臨床表現難以與其他痘病毒引起的疾病區分。因此，快速有效的實驗室檢測方法對控制MPV的暴發流行至關重要。

①PCR

 PCR技術是檢測猴痘病毒DNA的首選方法。一般來說，通常選擇胞外包膜蛋白基因(B6R)、DNA聚合酶基因E9L，DNA依賴的RNA聚合酶亞基18 (RPO18)基因以及補體結合蛋白C3L、F3L和N3R基因的保守區域作為PCR擴增的靶標。PCR診斷標本可直接來自皮疹——皮膚、液體或痂皮。此外，重組酶聚合酶擴增(RPA)、環介導等溫擴增(LAMP)技術和限制性長度片段多態性(RFLP) 技術也已被開發用于MPV DNA 檢測。

②血清學實驗

 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)可檢測患者血清中的特異性IgM和IgG 抗體。由于MPV與其他痘病毒之間存在抗原交叉反應，此方法特異性較低。

③電鏡觀察

 可利用電鏡觀察病毒的形態特征，同樣地，由于MPXV和其他痘病毒在形態上無法區分，該方法缺乏準確性。此外，電鏡觀察靈敏度不高且樣品制備復雜，周期較長。

④其他方法

免疫化學分析和多重免疫熒光成像可用于MPV抗原檢測。

6.MPV預防及治療

 大多數人類猴痘感染最初是由動物向人傳播造成的，應避免接觸患病或死亡的動物，同時避免與感染者或受污染物質密切接觸。目前，還沒有針對MPV感染的特異性疫苗和特異性藥物。據報道，天花疫苗可對猴痘提供85%的免疫保護。目前，預防天花病毒和MPV的兩種疫苗已獲批準：第二代疫苗ACAM 2000和第三代疫苗IMVAMUNE。此外，抗天花病毒藥物也可發揮一定的抗MPV作用。

用于預防和治療人類痘病毒的候選疫苗和抗病毒藥物 （Gong Q et al. Virologica Sinica. 2022）

參考來源

 1、//www.who.int/health-topics/monkeypox#tab=tab_1.

 2、Kumar N, Acharya A, Gendelman HE, Byrareddy SN. The 2022 outbreak and the pathobiology of the monkeypox virus. J Autoimmun. 2022 Jul;131:102855. doi: 10.1016/j.jaut.2022.102855. Epub 2022 Jun 25. PMID: 35760647.

 3、Gong Q, Wang C, Chuai X, Chiu S. Monkeypox virus: a re-emergent threat to humans. Virol Sin. 2022 Jul 9:S1995-820X(22)00120-1. doi: 10.1016/j.virs.2022.07.006. Epub ahead of print. PMID: 35820590.

 4、Kabuga AI, El Zowalaty ME. A review of the monkeypox virus and a recent outbreak of skin rash disease in Nigeria. J Med Virol. 2019 Apr;91(4):533-540. doi: 10.1002/jmv.25348. Epub 2018 Nov 19. PMID: 30357851.