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敲除界的yyds——維真小鼠gRNA pool克隆庫！

CRISPR/Cas9是一種新型的基因組編輯技術，具有簡單、成本低和高效的特點，被廣泛應用于多個物種的精確基因組編輯。在基因敲除實驗中，由于gRNA所介導的敲除效率難以預估，因此，為了提高切割效率，通常會靶向同一基因設計并合成多條gRNA。

維真生物現已建立了針對小鼠13000余個基因的gRNA Pool克隆現貨庫，分別針對每個基因設計了5條gRNAs，pool在一起克隆至AAV載體中，大大增加目的基因的敲除效果。

小鼠gRNA pool克隆載體圖

產品特色

①U6驅動gRNA，CAGmini驅動GFP，便于監測質粒轉染效率；

②載體骨架為AAV，可直接進行AAV包裝；

③非常適合與spCas9 AAV病毒或spCas9轉基因動物聯合應用；

④可出售整庫，也可出售單一子庫：分轉錄因子、蛋白激酶、磷酸酶、藥物靶點、膜蛋白等。

效果展示

針對小鼠Pten基因，我們設計了5條gRNAs，分別構建了5個單gRNA的質粒和gRNAs mix質粒。將5個單gRNA的質粒和gRNAs mix質粒分別搭配spCas9質粒轉染N2A細胞。轉染后24h，用puromycin進行篩選。轉染后72h，提取細胞總RNA，然后通過RT-PCR檢測小鼠Pten基因的敲除效果。結果顯示，gRNAs mix組相比單條gRNA組目的基因mRNA降低更顯著（圖1），通過克隆加測序分析了編輯位置處的插入、缺失和突變（圖2）。

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