AAV在心臟研究中的應用及注射方法
1. 背景介紹
心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)臟中的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)主(zhu)(zhu)要包括(kuo)(kuo)心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)肌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)(he)心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)臟成(cheng)纖維細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)兩大類(lei)。其中，心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)肌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)又分為工作細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)(he)自(zi)律(lv)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。工作細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)指(zhi)的(de)(de)(de)是可(ke)在(zai)外來(lai)刺(ci)激下產生興奮的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，包括(kuo)(kuo)心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)室肌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)(he)心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)房(fang)肌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。而自(zi)律(lv)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)指(zhi)的(de)(de)(de)是那些沒(mei)有(you)穩定靜息電位的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，可(ke)自(zi)動(dong)產生節律(lv)性的(de)(de)(de)興奮，主(zhu)(zhu)要包括(kuo)(kuo)P細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)（又稱起搏細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)）和(he)(he)浦肯(ken)野(ye)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。由于左心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)室的(de)(de)(de)心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)肌壁較(jiao)厚，所以在(zai)AAV的(de)(de)(de)注射(she)中，通常(chang)靶向左心(xin)(xin)(xin)(xin)(xin)室壁進行注射(she)。
維真生物AAV在(zai)心(xin)臟(zang)研究中(zhong)的(de)應用及注(zhu)射方(fang)法
(圖(tu)片來源(yuan)：External Structure Of Human Heart Anatomy | MedicineBTG.com)
2. 注射方法、注射量和啟動子的選擇
AAV在心(xin)臟(zang)中的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)方式有多(duo)(duo)種，通常文獻報道較多(duo)(duo)的(de)是心(xin)肌注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)和尾靜脈注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)，均(jun)能通過在體(ti)注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)感染心(xin)臟(zang)，所需AAV總量在10E10-10E11vg。心(xin)肌注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)對手術(shu)操作要求(qiu)較高，難(nan)度稍大，多(duo)(duo)采(cai)用小量多(duo)(duo)點注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)，注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)體(ti)積20μL/site，3-5點注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)。尾靜脈注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)則(ze)易(yi)于(yu)操作，但是特異(yi)性(xing)較心(xin)肌注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)稍弱，注(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)體(ti)積在100μL左(zuo)右。
AAV進行在(zai)體心(xin)臟研究(jiu)中，AAV9和(he)AAV8型對心(xin)臟的(de)感(gan)染(ran)效(xiao)率要(yao)優于其(qi)他血清型，且以AAV9型的(de)應用居(ju)多。要(yao)實現目的(de)基(ji)因在(zai)心(xin)臟中特(te)異性表達(da)，則推薦(jian)選(xuan)擇心(xin)臟特(te)異性的(de)啟動子cTNT和(he)αMHC。
3. 文獻與案例分享
研究者通過構建(jian)體(ti)內(nei)獲得(de)性耐(nai)藥的(de)(de)模型，檢測到JOSD1基因在這一(yi)過程(cheng)中(zhong)上調最為明顯，預示了其在耐(nai)藥中(zhong)的(de)(de)重(zhong)要作用(yong)。為進一(yi)步(bu)驗證(zheng)JOSD1在婦科腫(zhong)瘤中(zhong)的(de)(de)功能作用(yong)，研究者通過體(ti)外實驗，在婦科腫(zhong)瘤細(xi)胞系中(zhong)敲降JOSD1的(de)(de)表(biao)達。
圖(tu)1.CTNT心臟特異(yi)性(xing)更強
圖(tu)2.五種AAV血清型對心(xin)臟的感染效率檢測(ce)
圖3.不同血清型(xing)與不同病毒量感染心臟的效果(guo)圖
以上數(shu)據(ju)來源：《Robust Cardiomyocyte-Specific Gene Expression Following Systemic Injection of AAV: In Vivo Gene Delivery Follows a Poisson Distribution》
實驗動物：1周齡 C57BL/6 小鼠；
注(zhu)射方式：頸(jing)靜脈注(zhu)射；
血清型：AAV1/AAV2/AAV6/AAV8/AAV9；
病毒(du)量: 不同劑量（3.15×10E9vp；1×10E10vp；3.15×10E10vp；1×10E11vp），體積(ji)約(yue)20ul；
檢(jian)測時間：注射4周后冰凍切片檢(jian)測；
4. 維真生物腺相關病毒/AAV部分文章發表（心臟）
4.1 Yin L et al. 2019. FBXL10 regulates cardiac dysfunction in diabetic cardiomyopathy via the PKC β2 pathway. J Cell Mol Med. 23(4): 2558–2567.
4.2 Bing Li et al. 2018. Sirt1 Antisense Long Noncoding RNA Promotes Cardiomyocyte Proliferation by Enhancing the Stability of Sirt1. J Am Heart Assoc. 7(21): e009700.
4.3 Zhong L et al. 2019. SM22α (Smooth Muscle 22α) Prevents Aortic Aneurysm Formation by Inhibiting Smooth Muscle Cell Phenotypic Switching Through Suppressing Reactive Oxygen Species/NF-κB (Nuclear Factor-κB). Arterioscler Thromb Vasc Biol. 39(1):e10-e25.
4.4 Hu Y et al. 2019. Suppression of MicroRNA Let-7i-5p Promotes Cardiomyocyte Proliferation and Repairs Heart Function Post Injury by Targeting CCND2 and E2F2.Clin Sci (Lond).133(3): 425-441.
4.5 Wu QQ et al. 2019. The protective effect of high mobility group protein HMGA2 in pressure overload-induced cardiac remodeling. J Mol Cell Cardiol.128:160-178.
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