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1. 肝門靜脈(mo)注射

（1）通(tong)過腹腔注射(she)麻醉劑將成年(nian)小鼠(shu)麻醉，對小鼠腹部(bu)局(ju)部(bu)區域做去毛及消毒處理；

（2）在距劍(jian)突(tu)軟骨下方(fang)2-3mm處，做一(yi)個2-3cm的中線切(qie)口。

（3）暴露門靜(jing)脈，使用30G針頭(tou)在1min內均(jun)勻(yun)緩慢(man)注(zhu)射0.2 ml病毒懸(xuan)液(ye)。

注：門靜脈是一(yi)種相對較大的靜脈，提起肝前葉(xie)一(yi)般(ban)即可(ke)看到門靜脈。在手術過程中，用浸泡在生理鹽水中的無菌紗布覆蓋腸(chang)道，保持腸(chang)道濕潤。

（4）注(zhu)射后保持針位約10-20秒。取出(chu)(chu)針(zhen)后，做好(hao)防(fang)出(chu)(chu)血處理；

（5）縫合腹部，將小鼠(shu)放置于加(jia)熱燈(deng)下，直至恢復意識。然后(hou)將其(qi)放回籠子(zi)單獨(du)飼養(yang)，直到傷口(kou)完全愈(yu)合。

2. 肝(gan)內注射

（1）通過(guo)腹腔注射麻(ma)醉劑(ji)將成年小鼠麻(ma)醉，對小鼠(shu)腹(fu)部局部區(qu)域做去毛及消(xiao)毒(du)處理；

（2）在(zai)距(ju)劍突軟(ruan)骨下方2-3mm，做一個2-3cm的中線切口，以露出肝臟(zang)。

（3）用(yong)固(gu)定在(zai)結核菌(jun)素(su)注射(she)器(qi)上的30G針頭將病(bing)毒懸(xuan)液(ye)緩慢注入肝實質中(zhong)。

注:在注射過程中通過手術立(li)體鏡(jing)監測(ce)注(zhu)射部位，確保(bao)無(wu)出血或外滲。如(ru)果出(chu)現上(shang)述任何一種情況，需(xu)取出(chu)針頭，輕輕按壓止(zhi)血，然后選擇一個新的部(bu)位進行(xing)注射。

（4）取出(chu)針，用無菌紗(sha)布輕輕按壓止(zhi)血。

（5）再選擇其(qi)他部位進行注射。

注：一(yi)只成年小鼠(shu)一(yi)次可選(xuan)擇4 ~ 5個不同的(de)注(zhu)射位點(40 ~ 50μl/site)，總(zong)劑量可達200μl。

（6）縫(feng)合腹部，將小鼠放(fang)(fang)置于加熱燈(deng)下，直(zhi)至(zhi)恢復(fu)意識。然后將其放(fang)(fang)回籠子(zi)單獨飼養，直(zhi)到傷口完全愈(yu)合。

3. 尾靜脈(mo)注射

（1）將小鼠放(fang)在標(biao)準(zhun)限制器(qi)中，使注射器(qi)能(neng)夠(gou)完(wan)全接觸到整(zheng)個尾巴長(chang)度。

（2）將一(yi)根30G的針(zhen)頭(tou)固定在1cc結核菌素(su)注射器上，盡可能(neng)遠(yuan)的插入尾部(bu)側面靜脈(mo)。選(xuan)擇一(yi)個(ge)遠端部位，如果第一(yi)次(ci)注射(she)失敗，可以(yi)選(xuan)擇另(ling)一(yi)個(ge)更近端的注射(she)部位。

注：a：小鼠尾巴(ba)上較容易接觸到的靜脈(mo)位(wei)于尾(wei)巴的側面，且側靜脈(mo)非(fei)常淺，無需(xu)進針很深(shen)；小鼠尾部(bu)背面(mian)的靜脈很難常規注射(she)；尾部(bu)腹面(mian)的血管是動(dong)脈，不(bu)可注射(she)。

b：注射(she)前用溫水輕輕地加熱尾(wei)巴，可以使(shi)血管得到一定程度的舒張，便(bian)于注射(she)。

（3）針頭到位后，緩(huan)慢注射病(bing)毒懸液(ye)。

（4）注射完(wan)成后取下針頭，輕輕按壓(ya)止血(xue)，然后立即將小(xiao)鼠放回籠中。

注：使用此方法注射(she)成(cheng)年小鼠(shu)，病毒(du)用量控制在300 - 400μl較佳。

4. 新生小鼠(shu)靜脈注射

（1）需兩個人配合完成，一人固(gu)定，一人注射；

（2）注射前(qian)將小(xiao)鼠置于干(gan)毛巾上，減(jian)少活動及損傷；

（3）一人輕輕固定小鼠，使(shi)側面朝上(shang)，暴露眼睛至頸部(bu)的顳淺(qian)靜(jing)脈，置于放大鏡下；

（4）另一人沿著自頭至(zhi)頸的方向將30G的(de)注射針頭插入靜脈旁的(de)皮(pi)下，慢(man)慢(man)推進靜脈（新生(sheng)鼠皮(pi)膚呈現半(ban)透明，較易觀(guan)察）；

（5）慢慢注(zhu)射(she)(she)(she)病毒懸液；（如(ru)(ru)果注(zhu)射(she)(she)(she)成(cheng)(cheng)功，注(zhu)射(she)(she)(she)部位遠端靜脈(mo)會呈白色，如(ru)(ru)果未成(cheng)(cheng)功，皮(pi)下注(zhu)射(she)(she)(she)10μl即可看到明(ming)顯的(de)隆起）

（6）注(zhu)射完成后，取下針頭，輕輕按壓靜脈，通常2-3分鐘(zhong)會停止出(chu)血；

（7）將(jiang)新生鼠(shu)在加(jia)熱燈(deng)下照射后，放回母(mu)鼠(shu)身(shen)邊；

（8）如果注(zhu)射不成(cheng)功，讓小鼠恢復5-10分鐘，然后在(zai)另一側(ce)嘗試第二次注射；

注：使用(yong)此方法注射新生小鼠，病毒用(yong)量控(kong)制(zhi)在100μl以內較佳。