01
4in1 shRNA克隆案例分享
胃癌是侵襲性極強的惡性腫瘤之一,早期診斷率低,轉移率高。盡管胃癌在治療方面已經取得了一定的進展,但為了尋求更佳的治療手段,需要更好地了解其潛在發病機制和新的治療靶點。驅動蛋白超家族23基因(KIF23),在細胞質分離、軸突生長等多種細胞過程中發揮重要作用。目前,KIF23已被發現在多種腫瘤組織和細胞中高表達,提示KIF23與腫瘤發生有潛在的聯系。在本篇研究,作者發現KIF23的表達與胃癌的不良預后相關,且與腫瘤分期(pTNM)有關。體外實驗證明,KIF23的缺失對胃癌細胞的增殖有明顯的抑制作用。此外,KIF23基因敲除可顯著抑制小鼠胃癌細胞的增殖,并顯著下調腫瘤細胞增殖因子Ki67和PCNA的表達。綜上所述,這些數據表明KIF23可能是胃癌的一個潛在治療靶點。
產品 | 4in1 shKIF23 質粒 |
轉染細胞 | 胃癌細胞系MGC-803和SGC-7901 |
KIF23 在人胃癌細胞MGC-803和SGC-7901中低表達(qPCR和WB)
02
shRNA腺病毒案例分享
據報道,跨膜蛋白173(TMEM173)重組蛋白能參與內質網應激、炎癥和免疫過程,這些過程都與心肌肥大密切相關。TMEM173和自噬之間有密切而復雜的聯系,但它在自噬中的具體作用還有待進一步研究。在本文中,作者發現與野生型C57BL/6小鼠相比,Tmem173基因敲除(KO)的小鼠在橫向主動脈縮窄(TAC)6周后表現出更嚴重的肥大、纖維化、炎性浸潤和心臟功能障礙。透射電鏡和蛋白質水平顯示KO小鼠心肌自噬小體降解受到抑制。另外,苯腎上腺素處理的乳鼠心肌細胞的體外實驗表明,Tmem173基因的豐度與Lc3-Ⅱ的豐度和反映自噬體降解能力的紅色和黃色熒光點數呈負相關。這些結果表明,TMEM173可以改善自噬通量,并對壓力超負荷所致的心肌肥厚具有保護作用,暗示其可能成為未來治療心肌肥厚的潛在靶點。
產品 | Ad‐shRNA‐Tmem173 |
感染細胞 | 乳鼠心肌細胞 NRCMs |
MOI | 20 |
Tmem173下調對體外PE誘導的心肌細胞肥大的影響
03
4in1 shRNA腺病毒案例分享
產品 | murine PFKFB3 Ad-4in1 shRNA |
感染細胞 | 骨髓源性巨噬細胞BMMs |
MOI | 50 |
敲低PFKFB3的表達可降低成熟破骨細胞的數量大小且損壞F-肌動蛋白環
04
4in1 shRNA慢病毒案例分享
產品 | pLent-4in1 shUSP14-GFP |
感染細胞 | 乳腺癌細胞株 |
用途 | 構建穩轉細胞株 |
在多種乳腺癌細胞中敲低USP14的表達
05
mir30-based shRNA AAV案例分享
病毒產品 |
①AAV9-GFAP-GFP-miR30-shRNA(mAdora1) ②AAV8-MBP-GFP-miR30-shRNA(mAdora1) ③AAV8-MBP-GFP-miR30-shRNA(scramble) |
注射部位 | 左側杏仁核 |
注射量 | 1x10E11 vg/mouse |
流式細胞術分析顯示AAV病毒在左杏仁核少突膠質細胞中強烈、特異性表達
06
誘導性shRNA AAV案例分享
伏隔核神經元cAMP調控血腦屏障完整性和抑郁敏感性
中國藥科大學的研究人員通過代謝組學分析等手段對壓力應激誘導抑郁的小鼠模型進行研究,發現cAMP在NAC中特異性降低,并與抑郁程度呈正相關,在NAC中補充cAMP可以改善BBB的完整性和抑郁樣行為。RNA-Seq分析發現,cAMP下降主要是因為其合成酶Adcy5受抑制,且此過程只發生在神經元細胞中。通過降低NAc中Adcy5的表達,內源性調節神經元內cAMP合成,可調節對社會應激的敏感性。此外,NAc腦區cAMP不足降低了胞外基質蛋白reelin的表達,外源補充后促進了BBB完整性,并改善了抑郁樣行為。上述結果表明,神經元cAMP可能通過Reelin介導的細胞外基質信號調節NAC血腦屏障完整性的分子機制,為抑郁癥的防治提供了新思路。
病毒產品 |
①Dox 誘導性AAV2/9-shRNA-Adcy5 (2.02x10E12 vg/mL) ②AAV2/9-shRNA (2.38x10E12 vg/mL) |
注射部位 | 雙側伏隔核 |
注射方式 | 立體定向注射 |
注射量 | 每側0.5 μL |
注射速率 | 0.1μL/min |
伏隔核內神經元CAMP合成內源性調節后的行為變化