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光遺傳學技術

光(guang)遺傳學(xue)(xue)(optogenetics)又(you)稱光(guang)刺(ci)激基因工程(optical stimulation plus genetic engineering),是一種通過光(guang)學(xue)(xue)和遺傳學(xue)(xue)技(ji)術在活體動(dong)物(wu)腦內精(jing)準控(kong)制細胞行為的(de)技(ji)術。由(you)于其(qi)高(gao)度(du)的(de)時空特異性(xing),光(guang)遺傳技(ji)術廣泛應用(yong)于神經科學(xue)(xue)研究領域。

2010年,光遺(yi)傳學(xue)技(ji)術(shu)榮膺(ying)Nature Methods 年度生命(ming)科(ke)學(xue)技(ji)術(shu)。 2010年,被Science認為(wei)(wei)是近十年的突(tu)破之一(yi)(yi)。 光遺(yi)傳學(xue)技(ji)術(shu)再(zai)次被Nature Methods評(ping)為(wei)(wei)2016年值得關注(zhu)的八項技(ji)術(shu)之一(yi)(yi)。 未來,光遺(yi)傳技(ji)術(shu)將對神(shen)經及精神(shen)領(ling)域疾病的治(zhi)療及神(shen)經科(ke)學(xue)以外的組織功能研究貢獻更多力(li)量(liang)。

一、光遺傳學之前

1979年,Francis Crick提出(chu),神經科學(xue)領域急需開發(fa)出(chu)一種控制(zhi)技(ji)術,進而在不(bu)改(gai)變(bian)其(qi)它(ta)條件的情況下對大腦里的某種細胞(bao)進行操控。由于電刺激(ji)信號(electrode)無法對細胞(bao)進行精確(que)的定位刺激(ji),而化學(xue)藥物起效速度慢(man),無法精確(que)定時控制(zhi),于是(shi)Crick考慮是(shi)否可以利用光(guang)控技(ji)術。雖然微(wei)生物學(xue)家們早已發(fa)現一些可以表達可見光(guang)敏蛋白(visible light-gated protein),但當(dang)時還沒人將此聯系(xi)在一起。


二(er)、光遺傳學

1.光遺(yi)傳學(xue)的發展(zhan)歷程

2005年8月Karl Deisseroth實(shi)驗(yan)室發(fa)表的一篇文章為神經領域(yu)的科學家們帶來了一項期待(dai)已久的新(xin)技術——光遺傳學技術。這項技術的實(shi)現基(ji)于單(dan)組分控制工具——光敏蛋白的發(fa)現。




2.光遺傳學(xue)原理

2005年(nian)8月Karl Deisseroth實驗室(shi)發表的(de)一篇文章為神經(jing)領域(yu)的(de)科學(xue)(xue)家(jia)們帶(dai)來了一項(xiang)期待已久的(de)新(xin)技(ji)術(shu)——光遺傳(chuan)學(xue)(xue)技(ji)術(shu)。這項(xiang)技(ji)術(shu)的(de)實現基于(yu)單組分控制工具——光敏蛋白的(de)發現。

利用光(guang)(guang)敏(min)(min)通道蛋白在微秒級別通過光(guang)(guang)控制某一特(te)殊類型的(de)神(shen)經(jing)元。當(dang)使用特(te)定波長的(de)光(guang)(guang)照射神(shen)經(jing)元時(shi),細胞(bao)膜上的(de)光(guang)(guang)敏(min)(min)感離(li)子(zi)通道將加速細胞(bao)與(yu)(yu)細胞(bao)外界區域間陽離(li)子(zi)與(yu)(yu)陰離(li)子(zi)的(de)交換。光(guang)(guang)遺傳學(xue)實(shi)際上是通過基(ji)因改造,使特(te)定的(de)神(shen)經(jing)元細胞(bao)展現出光(guang)(guang)敏(min)(min)感特(te)性(xing),同時(shi)不改變細胞(bao)的(de)其他生理學(xue)特(te)性(xing)。




光遺傳(chuan)學(xue)的(de)基本原理(以ChR2和(he)NpHR為例)


3、光遺傳學操作步驟

在(zai)光(guang)(guang)遺傳操作中,細胞(bao)會表達特定(ding)的(de)(de)編碼光(guang)(guang)敏蛋白的(de)(de)基因(yin),然后(hou)使(shi)用光(guang)(guang)來改變(bian)細胞(bao)的(de)(de)行(xing)為。光(guang)(guang)遺傳學技術的(de)(de)應用主(zhu)要包(bao)括(kuo)以下幾個關鍵步驟:




4、光(guang)遺傳學所需的(de)輔助技術

光遺傳學技術包括的范圍是(shi)廣泛的。主要(yao)包括以下幾種。




5、光遺傳學技(ji)術的優勢——高時(shi)空分辨率

光遺(yi)傳(chuan)學技(ji)術(shu)在根(gen)本上解決(jue)了如何(he)精(jing)確調控細(xi)胞行(xing)為(wei)的(de)問題。這基(ji)于其(qi)具有高度時(shi)空(kong)(kong)特異性的(de)優(you)勢。光遺(yi)傳(chuan)學技(ji)術(shu)在時(shi)間上控制精(jing)度可達毫秒(ms)級(ji)別(bie),空(kong)(kong)間精(jing)度可達單個細(xi)胞級(ji)別(bie),是電(dian)信號刺激和化(hua)學藥物所(suo)無法比擬的(de)。


6、維(wei)真生物光敏通道蛋白

光敏感通道蛋白名稱 描述
ChR2 陽離子通道蛋白,來源于萊茵衣藻
ChR2(H134R) 陽離子通道蛋白,ChR2的突變體,可產生兩倍的光電流,但開關速度比野生型ChR2慢一倍。
ChETA 陽離子通道蛋白,ChR2的突變體,使神經元在激光刺激下可以發出200Hz的峰值(其他只可達到40Hz)。
C1V1 陽離子通道蛋白,由ChR1和由團藻發現的VChR1組合在一起的通道蛋白,在紅色激光刺激下打開通道。
NpHR(Halorhodopsin) 氯泵,在黃綠激光激活下會將氯離子打進神經元內,而抑制神經元活動。NpHR3.0相比NpHR帶有內質網和高爾基體輸出元件及來自鉀離子通道的膜元件,能夠實現在神經元細胞膜上的有效聚集。
Arch T(Archaerhodopsin) 質子泵,在黃色激光激活下將帶正電的質子轉移到細胞外。在特定條件下,可用于增加細胞內pH或減少細胞外基質的pH。與NpHR相比,當激光關閉時,Arch立即恢復到關閉狀態。Arch3.0相比NpHR帶有內質網和高爾基體輸出元件及來自鉀離子通道的膜元件,能夠實現在神經元細胞膜上的有效聚集。


7、維(wei)真光(guang)遺(yi)傳(chuan)學產品列(lie)表

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8、訂購(gou)方式(shi)

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